亮点
·建的逆转录病毒载体稳转细胞系可稳定生产逆转录病毒载体
·制作工艺更简化
·成本更低
·可更好地控制产品质量,在后期工业化具备绝对优势
概述
·逆转录病毒(retrovirus),又称为反转录病毒,是一类RNA病毒,其遗传信息并非存储在DNA上,而是在RNA上。不同于其他RNA病毒,逆转录病毒的RNA不进行自我复制,进入宿主细胞后,病毒内核的逆转录酶将RNA转录成cDNA,进而合成双链DNA,整合酶将双链DNA整合至宿主细胞染色体DNA上,从而将非病毒基因导入细胞体内,并可在体外进行有丝分裂将其传递给子代细胞。逆转录病毒特异性感染分裂期细胞,如胚胎干细胞、神经干细胞、造血干细胞及血液内的细胞等。在实际应用中,逆转录病毒载体因其转染范围广,转染率高,常被用于细胞与基因治疗。
·逆转录病毒载体(retroviral vector, RVV)是根据逆转录病毒的特性设计出的一种病毒表达载体。删除了部分或者全部编码病毒颗粒结构蛋白的基因,只保留了病毒包装转导所必须的顺式作用病毒序列,以留出更大空间插入外源基因及使病毒部分失活,这使其更易于大片段外源基因的包装且安全性更高。为了使无复制能力的逆转录病毒质粒产生有感染能力的病毒颗粒,深圳细胞谷使用的包装细胞将提供gag、pol、env基因编码的病毒结构蛋白,仅需将携带外源基因单个质粒转染至包装细胞株,通过两步包装法即可获得稳定逆转录病毒细胞株。通过借助表达逆转录病毒gag,pol外壳/逆转录酶和env包膜蛋白的包装细胞株,产生具有感染能力但没有病毒复制能力的假病毒颗粒。这种稳定逆转录病毒细胞株能够长期生产逆转录病毒,具有更优的批次间的稳定性。还能通过单克隆筛选的方法进一步提高逆转录病毒载体的滴度,同时实现逆转录病毒载体的工业化放大生产。
目前可量产的载体产品示例