研究进展|深圳细胞谷实现CAR-NK制备工艺重大突破

针对CAR-NK细胞早期研发及工业化生产中的痛点问题，深圳细胞谷核心研发团队对其底层技术进行长期攻关，最终在CAR-NK细胞制备工艺方面取得了突破性进展：运用深圳细胞谷独有的PackRV-SS系统生产的逆转录病毒载体转导NK细胞技术，其转导效率稳定在60%以上，且阳性率一直保持稳定；而且CAR-NK细胞在转导后培养的30天内增殖可达10000倍。此项突破性进展必将极大促进CAR-NK细胞在产品研发及临床应用的进程。欢迎从事NK和CAR-NK细胞治疗的企事业单位与深圳细胞谷合作，共同推进行业发展。

近两年来，除了CAR-T疗法备受万众瞩目外，另外一种新的免疫细胞疗法—— 自然杀伤（NK）细胞疗法也被视为抗肿瘤特别治疗实体肿瘤的新一代利器。然而，当前CAR-NK生产所面临的主要问题有：外源基因转导效率低且不稳定；NK细胞培养困难、体外增殖倍数低，无法满足临床治疗的细胞用量；初始病毒载体用量大，成本高昂等。而采用新型包膜设计的逆转录病毒可以实现原代NK细胞的高效转导，并通过稳定产毒的单克隆包装细胞系达到稳定、经济、大规模的逆转录病毒载体生产。

深圳细胞谷核心研发团队使用新型包膜设计的逆转录病毒载体转导NK细胞，在病毒转导2天后检测CAR-NK阳性率为67.7%。并且后续对CAR-NK的阳性率进行持续检测，直至病毒转导后第27天，CAR-NK的阳性率依然维持在71%，处于一个稳定高转导的水平。同时，在转导10天后，CAR-NK细胞中的NK细胞纯度（CD56+CD3-）始终维持在95%以上，其中T细胞（CD56-CD3+）含量低于0.5%。纯度极高，已达到并远超美国FDA认定的同种异体移植标准（NK细胞大于90%，T细胞小于5%），能够避免GVHD的发生。

研究团队对未转导的NK细胞以及转导后的CAR-NK细胞的增殖状态进行了持续的监测。NK细胞培养至32天增殖达到15000倍，CAR-NK细胞转导后培养27天增殖达到10000倍。无论是NK还是CAR-NK的增殖，均能满足市面上NK细胞疗法的细胞用量。并且在持续扩增中，NK细胞纯度始终大于96%。CAR-NK中CAR阳性率在一个月内始终大于65%，克服了其他NK细胞研究机构反映的CAR阳性率下降的问题。

研究团队对NK和CAR-NK细胞的体外杀伤能力也进行了初步的评估。实验结果显示，在高效靶比（3:1和10:1）时，NK和CAR-NK的杀伤效果没有显著的差异，二者对于靶细胞的杀伤效率均达到了90%以上。而在低效靶比（1:3和1:1）时，CAR-NK的杀伤效果要优于NK细胞。与CAR-T比较来看，在大多数效靶比（1:1、3:1和10:1）下，CAR-NK的杀伤效果都要优于CAR-T细胞。该数据表明逆转录病毒载体转导NK后，能在一定程度上增强NK细胞的体外杀伤能力。

深圳细胞谷已针对多种肿瘤靶点如 BCMA、CD19、CD38、CD22、Trop2、FRα、CD7、CD33、EGFR/EGFRVIII 等设计生产了CAR特异性逆转录病毒载体现货型产品，并均已实现了对人原代T细胞的高效转导，也将进一步在NK细胞，γδT细胞，巨噬细胞等免疫细胞治疗领域展开研究。深圳细胞谷热烈欢迎CGT领域企业和机构莅临交流和指导工作，利用逆转录病毒载体在科研和工业化生产中的巨大优势，共同开发基于逆转录病毒载体的细胞产品，共同推动新型CAR-NK细胞产品的问世。

【目前深圳细胞谷可提供基于逆转录病毒载体制备的CD19-CAR及GFP-Luciferase病毒产品试用装以供测试，可随时联系市场部和销售部获取试用装产品。】